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原标题:鸡马立克病疫苗研究进展

浏览次数:135 时间:2020-01-17

  鸡马立克病(Marek’sdisease,MD)是鸡的一种淋巴组织增生性疾病。该病的致病因子为马立克病病毒(Marek’sdiseasevirus,MDV),属于疱疹病毒属。世界动物卫生组织(OIE)已将MD归为动物B类传染性疾病。该病是第1个能用疫苗预防的肿瘤性疾病,因此受到了医学界、兽医学界、病毒学界的广泛关注。到目前为止,还没有有效的方法来治疗MD患鸡,仍通过疫苗预防控制该病的发生,所以对MD疫苗的研究一直是国内外众多学者研究的热点。
1 常规MD疫苗的类型
MDV有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,3种血清型,利用这3种血清型制成疫苗,3种血清型疫苗即可单独使用,也可混合使用。
1.1血清Ⅰ型疫苗
这类疫苗是用MDV通过细胞培养连续传代而致弱的,疫苗所含病毒是细胞结合性的,只有保证细胞的完整性,疫苗才具有免疫原性。最早的I型疫苗是英国的学者Churchill等研制出的HPRS-16/att疫苗,随后荷兰学者Rispens等将中等毒力的MDV株经鸭胚成纤维细胞(DEF)传代后获得无毒株,并研制成的CVI988疫苗,广泛应用于荷兰和其他国家。因为该毒株有扩散的特性并略微存在致病性,1990年以后英国才准许应用该疫苗。同期由CVI988衍生的疫苗称克隆C,据报道可有效抵抗超强毒MDV的感染,该疫苗只在短时间内在美国上市和应用,不久在该国退出应用。814株是我国哈尔滨兽医研究所于20世纪80年代研制的另一种疫苗,它可用代次广,抗母源抗体,性能稳定且安全。目前,常将弱化I型强毒株和DNA重组技术结合起来研究新型疫苗。
1.2血清Ⅱ型疫苗
系一类自然筛选的弱毒疫苗,血清Ⅱ型MDV都是天然非致病性的,广泛分布于鸡群中,这种疫苗毒可通过接触传播,感染后第5周产生很强的免疫力。1988年江苏农学院的黄仕霞等分离出的Ⅱ型Z4弱毒株是国内惟一的Ⅱ型MD疫苗株[5]。这一血清型具有代表性的是SB-1株,制成细胞结合性疫苗,单独使用就能产生广泛的保护力,但对超强毒株抵抗力不太强,可与HVT疫苗合用,充分抵抗超强毒株。美国和其他一些国家有商品SB-1疫苗出售,英国没有,除SB-1外,目前应用的血清Ⅱ型疫苗还有S-24、301B/12。
1.3血清Ⅲ型疫
此类疫苗是火鸡疱疹病毒(HVT)疫苗,其代表毒株Fc-126是由美国学者WritterRL博士从火鸡群中分离出来的1株无毒力品系,对鸡和火鸡均不致病,在鸡群内不传播;接种这种疫苗的鸡体,细胞中的HVT能使机体产生抗体,但不能中和MDV。该疫苗具有干扰作用,它先于MDV侵入鸡体细胞,能诱发阻止肿瘤形成的抗体,防止肿瘤的形成和发展。这种疫苗广泛应用,可有效抵抗强毒。既有细胞结合性活疫苗,又有易于储存、运输的冻干苗,目前正在使用的疫苗有:HVTFc-126和PB-THV1C4。
1.4二价苗和三价(多价)苗
自20世纪80年代开始,由于MDV毒力出现了超强毒,世界某些地区单价苗免疫失败屡屡发生,因此有些学者提出多价苗战略,先后研制出二价苗和三价苗。WitterRL报道了3种血清型疫苗单独使用和合用时抵抗强毒和超强毒MDV株感染的试验比较,证实了多价苗的效力。在美国主要使用Ⅱ型和Ⅲ型组成的疫苗,即SB-1或301B/12+HVTFc-126,西欧则使用I型和Ⅲ型组成的疫苗CVI988+HVTFc-126;我国使用的二价苗有814+HVTFc-126、SB-1+HVTFc-126及Z4+HVTFc-126。目前,我国使用的三价苗主要由814+SB-1+HVTFc-126组成。利用几种血清型病毒协同保护作用,使MD造成的损失得以降低,但多价苗只能用液氮保存和运输,成本很高。
2 MD基因工程疫苗
随着生物学技术的发展及其在疫苗研究领域的广泛应用,科学工作者努力研究比天然弱毒组成的常规疫苗免疫效果好,成本低,使用方便的抗MD基因工程疫苗。
2.1禽痘病毒为载体的MDV重组疫苗
禽痘病毒(FPV)是目前分子量最大的动物病毒,全长约300kb,是极具开发前景的载体系统。科研工作者研究发现MDV的糖蛋白gB具有良好的免疫原性,Chen及Ross等相继克隆并序列分析了MDVgB基因,发现gB编码的100ku的糖蛋白复合物可以激发抗MDV免疫保护反应,NazarianK等已建立表达gB的重组FPV,GA株gB蛋白具有很好的免疫保护作用,该重组病毒对MDV、vvMDV(超强MDV)、RBIB感染发病具有良好的免疫保护作用。YanagidaN等利用随机克隆的PFV的EcoRⅠ片段作为体内重组的同源DNA序列,分别在痘苗病毒7500bp和103bp人工合成的Ps启动子控制下表达了MDVgB蛋白和pp38蛋白,并通过免疫荧光检测筛选出重组PFV。gB蛋白重组PFV,接种雏鸡可使鸡获得抵抗强毒攻击的免疫力,而接种pp38蛋白重组病毒无保护作用。在MDV疫苗研究中,除gB糖蛋白还加强MDV其他糖蛋白的研究,寻找更多的疫苗候选分子。陈志琳等首次以FPV中国株为载体,构建表达MDVgI基因的重组病毒,为研制gI-FPV疫苗奠定了基础,也为进一步研制抗MD多价组合基因工程疫苗提供了有效组分。痘病毒重组表达一些结构性和非结构性MDV1抗原已建立,但没能产生理想的保护,包括gC、gD、UL47、UL48和pp38。接种MDV1或SB-1,能诱导MHC-I限制性的细胞免疫反应,MDV1的gD或gC没有保护作用。但用FPV重组表达的MDV1gC,MDV1gB和MDV1gD抗原混合接种比起单独gB接种,产生加强保护作用。LeeLF等利用rFPVs表达MDV1的gB1,gE,gI,gH和UL32,当用rFPV/gB1gIgEUL32+HVT免疫鸡时保护率达到94%。
2.2HVT为载体的MDV重组疫苗
HVT基因组可容纳25kb的外源基因,可以插入一些外源基因。用HVT重组病毒表达MDV抗原的优点是二者有交叉抗原反应,从而可以用大量的HVT蛋白来诱导免疫反应,HVT在雏鸡体内维持时间也长,比起FPV来能够长时间的表达MDV的抗原。RossLJN等[14]使用HVT做载体,在TK基因区插入gB构建基因工程苗,虽然TK基因的破坏使HVT在细胞内繁殖能力降低,但这种低效价重组病毒比其野毒株的免疫效果好。重组HVT疫苗的一个重要特点是可以插入多个外源基因,具有多重保护的潜力,人们对此非常感兴趣制成联苗使用,以预防MD和其他禽病。MorganRW等[15]将鸡新城疫病毒(NDV)的融合蛋白(F)基因和血凝素神经氨酸苷酶(HN)基因分别插入HVT非必需基因Us10,构建了NDVF-HVT和NDVHN-HVT两种重组体,它们能在细胞培养物上和鸡体内稳定而充足的感染,NDVF-HVT重组体接种的鸡可同时抵抗NDV和MDV的双重攻击,由此可见,利用HVT为载体结构建多联苗是实际可行的,关键在于插入合适的外源基因。这个重组方法的成功主要依赖于鉴定出了HVT基因的适宜位点,而后插入不削弱鸡体中病毒复制的外源基因,从而产生了理想的表达。迄今为止发现的最适合的插入点是Us10基因片段,它与不知功效的HSVUs10基因同源。ReddySK等[16]又构建了表达NDV的F和HN抗原,MDV1的gC和gB抗原的HVT重组疫苗,输卵管免疫接种结果保护了SPF鸡全身性ND和RBIB。此外,还建立了表达鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2抗原HVT重组苗,在HVT的gI和UL13位点插入IBDV的VP2抗原产生重组疫苗,接种后防止了鸡法氏囊的萎缩。HVT多联重组苗的构建成功不仅可以抗MD,同时还能对新城疫(ND)、IBD等产生保护,具有广泛的开发前景。
[作者:张鲁安,李岩等]

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